WWW.NAUKA.X-PDF.RU
БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА - Книги, издания, публикации
 


Pages:   || 2 | 3 |

«Кафедра «Бионанотехнология» ВЫПУСКНАЯ КВАЛИФИКАЦИРННАЯ РАБОТА «ИССЛЕДОВАНИЕ И РАЗРАБОТКА ТЕХНОЛОГИИ ПОЛУЧЕНИЯ АМИНОКИСЛОТ ИЗ ВТОРИЧНОГО СЫРЬЯ» выполнил студент гр. ПБ-91 Брехова В.П. _ ...»

-- [ Страница 1 ] --

Министерство образования и науки Российской Федерации

Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение

высшего профессионального образования

«Кемеровский технологический институт пищевой промышленности»

(ФГБО ВПО «КемТИПП»)

Кафедра «Бионанотехнология»

ВЫПУСКНАЯ КВАЛИФИКАЦИРННАЯ РАБОТА

«ИССЛЕДОВАНИЕ И РАЗРАБОТКА ТЕХНОЛОГИИ

ПОЛУЧЕНИЯ АМИНОКИСЛОТ ИЗ ВТОРИЧНОГО СЫРЬЯ»

выполнил студент гр. ПБ-91 Брехова В.П.

___________ руководитель доцент кафедры бионанотехнология, к.т.н Миленьтева И.С.

____________

Дата защиты_____________

Оценка__________________

Кемерово 2014 В настоящей работе рассмотрены важнейшие аминокислоты, их свойства и роль для человека, характеристика бактерий обладающих способностью синтезировать аминокислоты, способы получения аминокислот. Исследован состав сырья, подобран и изучен микроорганизм – продуцент аминокислоты, исследованы и оптимизированы технологические факторы, влияющие на процесс культивирования триптофана.

На основании проведенных исследований разработана технология получения аминокислоты из вторичного сырья.

Лист Изм. Лист № докум. Подпись Дата

ВВЕДЕНИЕ

Растительные аминокислоты образуют большую и важную группу органических соединений. Они обладают уникальными биологическими, фармакологическими и токсикологическими свойствами. Широкое распространение аминокислот в растениях и их высокая биологическая активность способствуют эффективному действию на организм лекарственного сырья и препаратов на его основе [1–5]. Анализ литературы показывает, что аминокислоты перспективны также в качестве ингибиторов коррозии [6].

Однако источником аминокислот могут быть не только сами растения, но и отходы, образующиеся в больших объемах при переработке разнообразного растительного сырья, например, в процессе получения крупы злаковых культур. Поэтому изучение качественного и количественного состава аминокислот в многотоннаж ных отходах переработки растительного сырья имеет практическое значение [7].

Актуальность работы. В настоящее время приоритетными являются научные исследования по разработки эффективных технологий комплексной переработки отходов производства, которые позволяют наиболее полно использовать исходное сырье с получением химических продуктов, избегая при этом накопления и попадания вредных веществ в окружающую среду. Перспективным сырьем для получения разных функциональных материалов, полезных человеку, являются многотоннажные отходы сельского хозяйства в первую очередь те, которые концентрируются на перерабатывающих предприятиях. Поэтому в последние годы внимание уделяется поиску новых способов выделения и анализа ценных веществ, в частности аминокислот, из неиспользуемых ранее растительных отходов [21]. Все большее внимание привлекают биотехнологии – использование микроорганизмов в качестве источников отдельных компонентов пищевых продуктов.

Таким примером служит получение аминокислот, исключительно микробным синтезом, выращивая микроорганизмы на вторичном сырье. Как ни непривычно это для нашего сознания, но именно микроорганизмы могут помочь решить серьЛист Изм. Лист № докум. Подпись Дата езную проблему с дефицитом белка. Возможности внедрения микроорганизмов в производство пищевых и кормовых продуктов определяются рядом особенностей.

Важнейшая из них – высокая скорость роста. В мире живых существ микроорганизмы не имеют себе равных по скорости производства белка. Весьма существенно, что для выращивания микроорганизмов могут использоваться самые разнообразные виды сырья (меласса, пивная дробина, солодовые ростки, зерновая и картофельная барда, стебли, ботва, выжимки плодов и овощей и т.д.) [37].

Аминокислоты обладают большой биологической активностью, поэтому их применяют в медицине, животноводстве, пищевой и микробиологической промышленности. Известно, что дефицит белка может быть компенсирован введением в корма незаменимых аминокислот. Из смеси из аминокислот составляют также композиции, имитирующие вкус и запах пищевых продуктов. Потребление аминокислот в мире возрастает ежегодно на 10 %.

Наряду с физическими и химическими методами получения аминокислот наилучшим является микробиологический синтез. Более 60 % всех производимых в настоящее время высокоочищенных препаратов аминокислот получают этим способо.

Целью данной работы является разработка технологии получение аминокислот из вторичного сырья. Для достижения в рамках дипломной работы были поставлены следующие цели:

- исследование химического состава сырья;

- подбор сырьевой основы питательной среды;

- проведение биосинтеза аминокислот;

- оптимизирование параметров проведения биосинтеза.

–  –  –

В данной главе рассмотрены виды аминокислот, способы их получения, продуценты аминокислот и вторичное сырье для их синтеза.

1.1 Аминокислоты как источник биологически активных веществ Аминокислоты являются карбоновыми кислотами, содержащими аминную и карбоксильную группы, которые находятся у одного и того же углеродного атома. В организме человека найдено около 70 аминокислот, причем 20 из них входят в состав белков. Это так называемые протеиногенные аминокислоты.

Аминокислоты кроме карбонильной и аминной группировок содержат боковые радикалы, причем именно эти химические группировки определяют большинство свойств той или иной аминокислоты. В общем виде формула аминокислоты может быть представлена следующим образом:

R–СН–COOH–NH2 Для одной из протеиногенных аминокислот, а именно для глицина, R представлен атомом водорода, для других аминокислот их боковая цепь имеет более сложное строение. Аминокислоты можно классифицировать на основе полярности их радикалов.

Физико-химические свойства аминокислот: все аминокислоты в водных растворах существуют в виде биполярных ионов, причем аминная группа у них протонирована, а карбоксильная — диссоциирована:

RС–СООН–NH2 Биполярность аминокислот обеспечивает ряд очень важных их свойств, таких, как высокая растворимость в воде, а также высокие дипольные моменты их молекул. Относительно высокие температуры плавления обусловлены тем, что их кристаллы обладают ионной решеткой. В водных растворах аминокисЛист Изм. Лист № докум. Подпись Дата лоты ведут себя либо как кислоты, либо как основания, проявляя тем самым амфотерные свойства [11, 36].

В зависимости от положения аминогруппы по отношению к карбоксильной группе различают -, -, -аминокислоты. Наибольшее значение в процессах жизнедеятельности играют -аминокислоты, из них как раз состоят белки.

Чаще используют тривиальные названия.

Наиболее важные кислоты представлены в таблице 1.1 [18].

Таблица 1.1 - Важнейшие -аминокислоты

–  –  –

Аминокислоты и их производные используются в качестве лекарственных средств в медицине. Так глицин оказывает укрепляющее действие на организм и стимулирует работу мозга. Лизин и метионин применяются в качестве добавок в корм сельскохозяйственным животным. Человеческий организм может синтезировать 12 из 20 аминокислот. Остальные восемь должны поступать в организм в готовом виде вместе с белками пещи, поэтому они называются незаменимыми.

Незаменимые аминокислоты включают: изолейцин, лейцин, лизин, метионин, фенилаланин, треонин, триптофан, валин и (для детей) гистидин. При ограниченном поступление такой аминокислоты в организм она становится лимитирующим веществом при построении любого белка, в состав которого она должна входить.

Если такое случается, то единственное, что может предпринять организм – это разрушить собственный белок, содержащий эту же аминокислоту. Большинство животных белков содержат все восемь незаменимых аминокислот в достаточных количествах. Любой белок, имеющий необходимое содержание всех незаменимых аминокислот, называется совершенным. Растительные белки несовершенны: в них низок уровень некоторых незаменимых аминокислот. Хотя ни один из растительных белков не может обеспечить нас всеми незаменимыми аминокислотами, смеси таких белков могут. Такие комбинированные продукты питания, которые

Лист

Изм. Лист № докум. Подпись Дата содержат взаимодополняющие (комплементарные) белки, входят в состав традиционной кухни всех народов мира [4].

Аминокислоты являются основными составными частями и строительными элементами белковой молекулы.

Молекула белка построена из 100 или более остатков аминокислот, ковалентно связанных в полимерные цепи. В человеческом организме 5 миллионов белков, причем ни один из белков человека не идентичен с белком любого другого живого организма [8].

Несмотря на такое разнообразие белковых структур для их построения необходимы всего 22 аминокислоты. Незаменимые аминокислоты, их всего 9, должны поступать с пищей человека, они не синтезируются в организме человека, остальные аминокислоты могут образовываться в нашем организме из других аминокислот [39].

Биологические функции белков очень разнообразны. Они выполняют каталитические, регуляторные, структурные, двигательные, транспортные, защитные, запасные и другие функции. Белки составляют основу биомембран, важнейшей составной части клетки и клеточных компонентов [43].

Исключительное свойство белка – самоорганизация структуры, то есть способность самопроизвольно создавать определенную свойственную только данному белку структуру. Для того чтобы организм мог эффективно использовать и синтезировать белок, должны присутствовать все незаменимые аминокислоты и в необходимой пропорции. Даже временное отсутствие одной незаменимой аминокислоты может отрицательно сказаться на синтезе белка. При уменьшении количества любой незаменимой аминокислоты или ее отсутствии пропорционально уменьшается эффективность всех остальных [25].

Многие факторы играют роль в появлении дефицита незаменимых аминокислот, даже при сбалансированном питании. Пониженная абсорбция, стресс, инфекции, травмы, химиотерапия, возраст и другие причины – все это может сказаться на дефиците незаменимых аминокислот в организме.

Лист

Изм. Лист № докум. Подпись Дата Помимо 22 аминокислот, входящих в состав белков, известно свыше 150 других, которые встречаются в различных клетках и тканях либо в свободном, либо в связанном виде, но никогда не встречаются в составе белков.

Значение аминокислот не ограничивается их ролью в синтезе тканевых белков. Каждая из них выполняет в организме свои особые функции, направленные на поддержание гомеостаза организма [27, 42].

В настоящее время существуют целые наборы продуктов, состоящие из отдельных аминокислот, направленных на профилактику заболеваний и лечение различных недугов.

Аргенин – белковообразующая заменимая аминокислота для взрослых, а для детей является незаменимой. В мире аргинин называют самой важной аминокислотой для кардиологии и иммунитета. Аргинин основной донатор оксида азота (NO) – очень мощного сосудорасширяющего фактора и нейромедиатора, поэтому ее успешно можно назначать при сердечных заболеваниях (до 10–15 г в день).

Ежедневные дозы от 6 до 17 г снижают уровень ЛНП-холестерина (липопротеины низкой плотности), не уменьшая ЛВП-холестерина (липопротеины высокой плотности). Аргинин способствует здоровой коронарной микроциркуляции, препятствуя образованию сгустков крови, которые могут вызывать инфаркты и инсульты. Аргинин повышает функцию Т-клеточного звена иммунитета может увеличивать вес тимуса, ответственного за большую часть иммунных функций (до 1,5 г в сутки). Аргинин играет важную роль в мышечном обмене: способствует снижению веса, так как ускоряет рост мышечной массы и сокращает жировой объем. В высоких концентрациях он встречается в коже и соединительных тканях, что позволяет использовать его в лечении и восстановлении поврежденных тканей.

Лица, страдающие вирусными инфекциями такими как герпес не должны принимать добавку аргинина. Не следует принимать аргинин страдающим шизофренией. Во избежание риска активизации свободно-радикального окисления рекомендуется сочетать с антиоксидантами. Побочные действия от аргенина возникают при дозировке больше 15 г – диарея, слабость, тошнота, негативное влияние на поджелудочную железу [33].

Лист

Изм. Лист № докум. Подпись Дата Лизин – является одной из девяти незаменимых белковобразующих аминокислот, получить которые мы можем только с пищей. Вегетарианцы и сторонники низкожировой диеты могут не полностью удовлетворять свою потребность в этой аминокислоте. Ежедневный прием 500 мг добавки лизина восполнит этот пробел в питании. Лизин необходим для роста, регенерации тканей, производства гормонов, антител, а так же ферментов.

Лизин как лечебная формула нам интересен в первую очередь для борьбы с герпесом, особенно в сочетании с витамином С и биофлавоноидами в составе безсахарной диеты (3–5 г в сутки).

Лизин улучшает усвоение кальция из крови и транспорт его в костную ткань, поэтому он может применятся в качестве неотъемлемой части программы лечения и профилактики остеопороза (500 мг в сутки). Лизин замедляет повреждение хрусталика, особенно при диабетической ретинопатии (до 1 г в сутки).

Совместное назначение лизина и аргинина (1–2 г в сутки) повышает иммунный ответ организма, количество и активность нейтрофилов.

Лизин в сочетании с пролином и витамином С будет полезен при патологии сердца и сосудов (до 5 г в сутки), так как предупреждает образование липопротеинов, вызывающих закупорку артерий. Кроме того, лизин поддерживает уровень энергии и сохраняет здоровым сердце, благодаря карнитину, который в организме из него образуется [33, 10].

Пролин – это белковообразующая заменимая аминокислота. Пролин – химический маркер коллагена, который является основным биохимическим и морфологическим компонентом соединительной ткани. В присутствии кофакторов железа, витамина С, кислорода пролин формирует и стабилизирует трехспиральную молекулу коллагена. Он помогает при лечении труднозаживающих ран, язв, ожогов, ликвидирует сосудистые дефекты, укрепляет суставные соединения, сердечную мышцу (до 1,5 г в сутки). Но когда преобладает синтез коллагена над его катаболизмом, пролин будет противопоказан [44].

Цистеин – заменимая серосодержащая аминокислота, играет важную роль в процессах формирования тканей кожи. Имеет значение для дезинтокцикационных процессов. Входит в состав -кератина, основного белка ногтей, кожи и волос.

Лист Изм. Лист № докум. Подпись Дата L-цистеин эффективное муколитическое вещество, разжижает мокроту, облегчает ее выделение, способствует отхаркиванию, уменьшает воспалительные явления. Благодаря этому он может оказывать положительное воздействие при лечении бронхита, эмфиземы, туберкулеза и других заболеваний бронхолегочной системы, сопровождающихся повышенной вязкостью мокроты (до 1,5 г в сутки). Цистеин является предшественником таурина; включен в некоторые пищеварительные ферменты; предшественник глютатиона, чем обусловлено его детоксицирующее действие. Цистеин – главное белковое соединение L-кератина кожи, волос, ногтей; включен в синтез коллагена; стимулирует активность лейкоцитов. Является хелатным соединением; связывает растворимое железо; благодаря содержанию метильных групп способствует нормальной функции печени, предупреждает ее жировое перерождение [41].

Цистеин помогает обезвредить токсины и защищает организм от вредного воздействия радиации, свободных радикалов, следовательно, предохраняет от старения кожи, уплотнения артерий, предупреждает артрит и, наконец, рак и СПИД (до 3 г в сутки).

Цистеин будет полезен при выпадении волос у женщин. Многие женщины, сидящие на растительной диете, недоумевают, почему у них выпадают волосы.

Причиной тому является недостаток серы в организме. Применение цистеина успешно остановит этот неприятный процесс (до 5 г в сутки) [29].

Глутатион – это белок-трипептид, то есть продукт, состоящий из трех аминокислот – глицина, цистеина и глутаминовой кислоты. Секрет его мощи заключается в наличие серосодержащих групп. Глутатион один из лучших антиоксидантов; обеспечивает неспецифический транспорт аминокислот в клетки мозга в составе фермента глютатион-S-трансферазы; оказывает мощное детоксикационное действие, восстанавливает печеночные клетки, обеспечивая пластические и энергетические потребности организма. Кроме собственно глутатиона, «Глутатион» содержит порошок брюссельской капусты, который потенцирует и расширяет его фармакологические свойства Главная антиоксидантная роль глутатиона заключается в защите иммунных клеток, в первую очередь лимфоцитов [31].

Лист

Изм. Лист № докум. Подпись Дата Брюссельская капуста содержит активаторы глютатиона – витамины В1, В6, С, каротиноиды, микроэлементы, более 15 аминокислот, в том числе лизин, метионин, триптофан. Оказывает противовоспалительное, желчегонное действие, стимулирует секреторную и репаративную функции печени. Благодаря наличию биологически активного компонента – индол-3-карбинола крестоцветных, обладает выраженным онкопротекторным, антиоксидантным и гипохолестеринемическим действием.

Обеспечивая такую высокую антиоксидантную защиту «Глутатион» будет полезен в лечении заболеваний сердечно-сосудистой патологии, артрита, гепатобилиарной системы, заболеваний желудочно-кишечного тракта, бронхо-легочной патологии, заболеваний периферической и центральной нервной системы (до 150 мг глутатиона в сутки).

«Глутатион» целесообразно принимать с «НАК Комплексом» вследствие тесной взаимосвязи между выработкой и обменом этих веществ. При пероральном приеме глутатион частично расщепляется пищеварительной системой на составляющие аминокислоты, а НАК будет поддерживать его уровень в организме [20].

Глутамин – это заменимая аминокислота, содержащая не один, а два атома азота, поэтому может быть лучшим его источником в построении любой аминокислоты в организме.

Он является также «топливом» для мозга, так как легко преодолевает гематоэнцефалический барьер. В мозге глутамин превращается в глутаминовую кислоту, и наоборот. Он также повышает уровень -аминомасляной кислоты, которая необходима для нормальной мозговой деятельности и умственной активности.

Глутамин важен для поддержания целостности кишечника, восстанавливает слизистые оболочки толстой кишки, уменьшает воспаление желудка. Его называют «фактором кишечной проницаемости» (до 10 г в сутки).

Глутамин участвует в синтезе белков скелетной и гладкой мускулатуры, поэтому его добавки будут полезны лицам, соблюдающим гипокальциевую диету и культуристам, а также тем, кто вынужден соблюдать длительный постельный режим.

Глутамин полезен после хирургического вмешательства (когда израсходованы многие белки, а глутамин идет на их построение), при лечении артрита, аутоимЛист Изм. Лист № докум. Подпись Дата мунных заболеваний, фиброза, таких заболеваний соединительных тканей как полимиозит, склеродермия, а также тканевых повреждений, являющихся последствием лучевой терапии рака (до 15 г в сутки).

Добавки глутамина успешно используют в лечении шизофрении и старческих отклонений, при импотенции и алкоголизме (до 12 г в сутки).

Глутамин участвует в выработке глутатиона – очень мощного антиоксиданта, нейтрализующего вредные соединения.

Биодобавка «Глутамин» кроме субстанции самого L-глутамина содержит еще витамины С, Е, -каротин и селен, усиливающие его антиоксидантные свойства [35].

ГАМК (-аминомасляная или -аминобутировая кислота). ГАМК не является белковообразующей аминокислотой, она обеспечивает передачу нервных импульсов между клетками мозга, является ингибиторным нейротрансмиттером.

Для более высокой биодоступности в продукт «ГАБА» включен витамин В6.

Этот витамин участвует в реакции декарбоксилирования как пиридоксальзависимый катализатор синтеза g-аминобутирата.

ГАМК – это эффективный и безопасный природный транквилизатор, снимающий судорожные припадки, подавленность, тревогу, депрессию.

ГАМК улучшает динамику нервных процессов в головном мозге, улучшая мышление, память (500 мг в сутки). «ГАБА» оказывает седативное действие, сходное с действием бензодиазопиновых препаратов (валиум, реланиум, тазепам), однако не вызывает зависимости и привыкания.

Она используется в лечении эпилепсии, гипертензии, полезна при пониженной половой активности, простатите (от 1 до 3 г в сутки) [37].

Таурин – это 2-аминоэтилсульфониевая кислота, относящаяся к -аминокислотам. В организм поступает с белковой пищей и может быть синтезирован в печени из цистеина и метионина при наличии достаточного количества витамина В6.

Однако различные патологические состояния и нарушения обмена приводят к дефициту таурина в организме, а для вегетарианцев синтез таурина в организме вообще проблематичен.

Лист

Изм. Лист № докум. Подпись Дата Введенный в чистом виде извне таурин хорошо всасывается из ЖКТ и легко проникает во все ткани и жидкости.

Значение таурина переоценить невозможно. Он препятствует потере ионов калия и магния миокардом, способствует выходу ионов натрия из клетки. Он действует как диуретик, причем в отличие от химических диуретиков не является клеточным ядом. В связи с этим его полезно назначать при гипертонии, отеках различного происхождения (1,5 г в сутки).

Помимо диуретического действия таурин укрепляет сердечную мышцу и поддерживает баланс кальция, поэтому необходим при сердечной недостаточности (до 2 г в сутки). Поскольку калий и магний крайне важны для стабилизации сердечного ритма, «Вита-Таурин» будет показан при лечении аритмии. Кроме того, он предупреждает прилипание холестерина к стенкам артерий, препятствует агрегации тромбоцитов, тем самым снижает образование тромбов.

Таурин способствует улучшению энергетических процессов. Играет важную роль в обмене жиров, входит в состав парных желчных кислот (таурохолевой, тауродезоксихолевой), способствует эмульгированию жиров в кишечнике.

Он стимулирует репаративные процессы при поражениях тканей глаза и может быть полезен при дистрофиях роговицы, диабетических, травматических и лучевых катарактах, при дистрофических поражениях сетчатой оболочки глаза, в том числе наследственной дегенерации.

«Вита-Таурин» играет роль нейромедиаторной аминокислоты (в мозге), тормозящей синаптическую передачу, обладает противосудорожной активностью (до 4 г в сутки).

У больных диабетом II типа таурин повышает чувствительность клеток к инсулину; при диабете I типа – приводит к долговременному снижению уровня сахара и к уменьшению аномальной активности тромбоцитов.

Эту аминокислоту не следует принимать при язвенной болезни желудка и двенадцатиперстной кишки, она может повысить выделение кислоты в желудке.

Все аминокислоты необходимо принимать натощак за 30 мин до еды или между длительными приемами пищи [33, 16, 7].

–  –  –

-амино-3-(1Н индол-3-ил)пропионовая кислата или незаменимая аминокислота триптофан хорошо растворима в воде, ограниченно в спирте, не растворима в диэтиловом эфире. Триптофан представляет собой гетероциклическую аминокислоту и имеет формулу, показанную на рисунке 1.2.1, и является одной из важнейших аминокислот с обширным спектром действия. Существует в двух оптически изомерных формах – L и D. Триптофан впервые выделен из казеина. Триптофан используется клетками млекопитающих – для биосинтеза никотиновой кислоты (витамин РР) и серотонина, который в свою очередь в ряде случаев является доказанным медиатором нервной системы как на периферии, так и в нервных центрах.

Рисунок 1.2.1 – Формула аминокислоты триптофан

Триптофан используется организмом также и для создания мышечных белков, белков антител иммунной системы, участвует в синтезе мелатонина и карнитина и является необходимым стройматериалом для организма [10].

Суточная потребность взрослого человека в триптофане составляет 0,25 мг, детей до 7 лет – около 1 г. Рекомендуемая суточная потребность взрослого человека в триптофане составляет 3,5 мг/ кг массы тела.

Триптофан регулирует функцию эндокринного аппарата, предупреждающего анемию, регулирующего кровяное давление, отвечающего за синтез гемогло

<

Лист

Изм. Лист № докум. Подпись Дата бина. Потребление триптофана заставляет гипофиз вырабатывать большее количество гормона роста.

Предполагают, что эта аминокислота стимулирует секрецию инсулина, который в свою очередь активизирует синтез жирных кислот в печени. Особое значение эта аминокислота имеет в фармакологии, где она и ее производные применяются в качестве ингредиентов многих лекарственных средств.

При таких тяжелых заболеваниях, как рак, туберкулез, диабет триптофан способствует нормальному функционированию различных систем организма. Поскольку триптофан относится к числу незаменимых аминокислот – его дефицит в рационе, может вызывать симптомы, характерные для белковой недостаточности:

потерю веса и нарушение роста у детей.

В сочетании с недостатком в пище ниацина, отсутствие триптофана также может вызывать пеллагру, заболевание, которое характеризуется дерматитом, диареей, деменцией и приводящее к смерти. Это заболевание встречается довольно редко, однако дефицит триптофана может легко к нему привести.

Также дефицит триптофана в диете может привести к снижению уровня серотонина. Низкий уровень серотонина связан с депрессией, беспокойством, раздражительностью, нетерпеливостью, импульсивностью, неспособностью сосредоточиться, увеличением веса, перееданием, тягой к углеводам, ухудшением памяти и бессонницей.

На недостаток триптофана могут указывать:

– депрессия

– беспокойство

– раздражительность

– импульсивность

– неспособность сконцентрироваться

– увеличение массы тела или необъяснимая потеря веса

– замедленный рост у детей

– переедание и/или «тяга к углеводам»

– плохой сон/бессонница

Лист

Изм. Лист № докум. Подпись Дата Витамин В6 необходим для преобразования триптофана в ниацин и серотонин. Следовательно, дефицит витамина В 6 в рационе может привести к снижению уровня серотонина и/или нарушению процесса преобразования триптофана в ниацин.

Кроме того, некоторые диеты и факторы среды ослабляют превращение триптофана в серотонин, в том числе: курение, чрезмерное потребление сахара, алкоголя, белков, гипогликемия и диабет.

Симптомы переизбытка триптофана Высокое содержание триптофана в пищевом рационе как известно, не вызывает его переизбытка в организме. Кроме того, триптофан назначается в терапевтических целях, в качестве лекарственного средства или пищевой добавки, в дозах, превышающих пять граммов в день, и не вызывает каких-либо побочных эффектов.

Особенно во время беременности повышается необходимость потребления женским организмом в таких аминокислотах как: триптофан и лизин, а для грудных детей – триптофан и изолейцин. Сам же аминокислотный состав грудного молока может быть представлен уникальным составом аминокислот: триптофан, метионин, гистидин, лейцин и цистин, обеспечивающим интенсивные процессы роста и развития ребенка. Исследования последних лет позволили выявить в грудном молоке еще и аминокислоту таурин, которой придается большое значение как фактору модулятора роста, определяющему структурную и функциональную целостность клеточных мембран.

Триптофан как предшественник серотонина оказывает антидепрессантное действие на организм, способствует снятию гиперактивности, навязчивых состояний у детей, тревожности перед менструацией у женщин, фибромиалгии и синдрома хронической усталости, способствует хорошему засыпанию и нормальному сну как в раннем возрасте, так в особенности в пожилом.

Необходимо отметить еще один интересный факт, что значительное увеличение потребности организма в незаменимых аминокислотах наблюдается после больших потерь крови, ожогов, а также во время других процессов, сопровождаемых регенерацией тканей.

Лист Изм. Лист № докум. Подпись Дата Триптофан также принимает значительное участие в исправлении ошибок процесса удвоения ДНК. Вместе с лизином, они образуют трипептид лизинтриптофан-лизин, который исправляет ошибки, возникающие при удвоении ДНК.

Эта характеристика триптофана имеет первостепенное значение при беременности и для предотвращения образования раковых клеток.

При пополнении запасов триптофана мозгом лучше регулируется содержание соли в организме. Повышается порог болевой чувствительности. Выработка кислоты в желудке находится под строгим контролем. Кровяное давление нормализуется, что делает возможным полноценное функционирование всего организма: почек, мозга, печени, легких, пищеварительной системы и суставов.

Однако врождённое отсутствие у человека, окисляющего триптофан фермента – триптофан-пирролазы приводит к слабоумию. Нарушения обмена триптофана у человека могут служить показателями ряда тяжёлых заболеваний, таких как туберкулёз, рак, и сахарный диабет [39, 23].

1.3 Способы получения аминокислот

Технология получения аминокислот базируется на принципах ферментации продуцентов и выделении вторичных метаболитов, то есть размножают маточную культуру вначале на агаризованной среде в пробирках, затем на жидкой среде в колбах, инокуляторах и посевных аппаратах, а затем в головных (основных) ферментаторах. Обработку культуральных жидкостей и выделение аминокислот проводят по схеме, аналогичной схеме получения антибиотиков. Изолированные чистые кристаллы целевого продукта обычно высушивают под вакуумом и упаковывают [23].

–  –  –

Известны два способа получения аминокислот: одноступенчатый и двухступенчатый. Согласно первому способу, например, мутантный полиауксотрофный штамм продуцент аминокислоты культивируют на оптимальной для биосинтеза среде [30].

Целевой продукт накапливается в культуральной жидкости, из которой его выделяют согласно схеме на рисунке 1.3.1.

Рисунок 1.3.

1 – Примерная технологическая схема получения аминокислот 1 – ферментатор; 2 – охладитель; 3, 9 – рефрижераторы; 4 – емкость для предварительной обработки; 5 – центрифуга; 6 – вакуум-упариватель; 7 – аппарат прямой; 8 – барабанный фильтр; А, Б – пути; 10 – аппарат для ультрофилырации; 11 – емкость для консервации раствора фермента; 12 – мембранный фильтр; 13 – накопитель жидкого консерванта; 14 – емкость для осаждения фермента; 15 – фильтрпресс; 16 – распылительная сушилка; 17 – накопитель сухого концентрата.

–  –  –

Изм. Лист № докум. Подпись Дата 1.3.2 Двухступенчатый метод получения аминокислот В двухступенчатом способе микроб – продуцент культивируют в среде, где он получается и синтезирует все необходимые ингредиенты для последующего синтеза (в идиофазу) целевого продукта.

Если ферменты биосинтеза аминокислоты накапливаются внутриклеточно, но после первой ступени клетки сепарируют, дезинтегрируют и применяют клеточный сок. В других случаях для целей биосинтеза целевых продуктов применяют непосредственно клетки [12].

1.3.3 Промышленный синтез аминокислот

В промышленных масштабах белковые аминокислоты получают:

1. Гидролизом природного белоксодержащего сырья.

2. Химическим синтезом.

3. Микробиологический синтезом.

4.Биотрансформацией предшественников аминокислот с помощью микроорганизмов или выделенных из них ферментов (химико-микробиологический метод) [19].

При гидролизе отходы пищевой и молочной промышленности нагревают с растворами кислот или щелочей при 100–105 0С в течение 20–48 ч. Чаще всего используют 20 % раствор соляной кислоты, обеспечивающий глубокий гидролиз белка. Лучшим способом уменьшения потерь белка при гидролизе является проведение его в вакууме или в атмосфере инертного газа, а также соблюдение высокого соотношения количества кислоты, взятой для гидролиза и массы белка (200:1).

Раньше методом гидролиза получали аминокислоты исключительно для фармацевтических и научных целей. Сейчас сфера использования белковых гидролизатов существенно расширилась. Их применяют в медицине, животноводстве, пищевой и микробиологической промышленности [15].

Лист Изм. Лист № докум. Подпись Дата Химический синтез более универсален, чем микробиологический, и позволяет получать соединения любой возможной структуры. Здесь используется непищевое минеральное сырье, достигается любая концентрация продукта, однако, как правило, процесс многостадиен и требует более сложной аппаратуры [28].

Оба способа обеспечивают получение природных аминокислот необходимой степени химической и оптической чистоты. Так что в конечном счете, когда речь идет о промышленном производстве, последнее слово остается за экономикой: по данным зарубежных специалистов, при больших масштабах химические методы становятся более рентабельными.

Наиболее широко разработан промышленный синтез метионина аминокислоты, главным потребителем которой является птицеводство. Исходным веществом служит пропилен – продукт крекинга нефти. Пропилен окисляется до акролеина, который в результате серии реакций, превращается в рацемический метионин.

В результате химического синтеза обычно получается смесь равных количеств L и D-изомеров аминокислот, в то время как в состав белков входят исключительно L-изомеры. Эти же изомеры питательны. D-изомеры организмом, как правило, не усваиваются и являются балластом. Следовательно, необходимо разделение, что неминуемо отрицательно сказывается на экономике [19].

Наиболее перспективен и экономически выгоден микробиологический синтез аминокислот. Более 60 % всех производимых в настоящее время высокоочищенных препаратов аминокислот получают этим способом [14]. Главное преимущество которого состоит в возможности получения аминокислот на основе возобновляемого сырья. Промышленное производство аминокислот стало возможным после открытия способности некоторых микроорганизмов выделять в культуральную среду значительных количествах какой-либо одной аминокислоты. При этом было подмечено, что продуктивные штаммы можно улучшать посредством селекции мутантов с измененной генетической программой. Это роды Brevibacterium, Micrococcus, Corinebacterium, Arthrobacter [40].

–  –  –

Специфические ферменты, регулирующие биосинтез аминокислот, широко распространены у бактерий; они с определенной глубиной изучены у Escherichia coli, Salmonella typhimurium, Bacillus subtilis и прочие. У грибов, на аминокислотное лимитирование, отмечается некоординированное, параллельное возрастания уровня ферментов, катализирующих реакции биосинтеза различных аминокислот. Этот «общий контроль биосинтеза аминокислот» был также назван «метаболическим интерблоком», или «перекрестнопутевой регуляцией», впервые выявленной у Neurospora crassa в 1965 г, а позднее у Saccharomyces cerevisiae, Aspergillus nidulas и других грибов [17].

В гиперпродукции отдельных аминокислот культурами Escherichia coli, Serratia marcescens и другие важную роль играют Feedak-репрессия, например, при биосинтезе ароматических аминокислот на последних стадиях [45].

В любом живом организме аминокислоты расходуются прежде всего на биосинтез первичных метаолитов – ферментных и неферментных белков. Следовательно, кроме биосинтеза аминокислот de novo, возможен другой путь их получения, а именно – из гидролизатов соответствующих белков (триптофан разрушается при кислотном гидролизе), в том числе из нативной биомассы микробных клеток [13].

Природные аминокислоты являются, как правило, оптически активными L- и D-формами, которые трудно разделить. Вот почему микробный синтез с помощью коринебактерий и некоторых других микробов является ныне основным и экономически выгодным. Получены микробы – суперпродуценты из родов Brevibacterium, Corynebacterium, Micrococcus и другие, с помощью которых освоено крупнотоннажное производство не только глутамата, но и L-лизина, L-валина, L-гистидина и других.

При суперпродукции уровень экспрессии клонированного гена выражается в синтезе специфического белка в количестве 2 % от всех растворимых белков клетки хозяина. В настоящее время имеются продуценты, у которых количество синтезируемого специфического белка достигает 10–15 % (здесь важнейшую роль играют многокопийные плазмиды, несущее Лист Изм. Лист № докум. Подпись Дата встроенный гены). Генно-инженерными методами во ВНИИ генетики и селекции промышленных микроорганизмов (Москва) был получен штамм Escherichia coli, обладающий сверхпродукцией L-треонина (30 г/л за 40 ч ферментации) [22, 3].

С любым штаммом-продуцентом какой-либо аминокислоты необходимо внимательное и бережное обращение в целях поддерживания ее в активном состоянии в течение длительного времени.

Получен штамм Escherichia coli, продуцирующий за 48 ч 27 г/л L -пролина, и штамм, продуцирующий до 22,4 г/л L-фенилаланин.

С помощью Corynebacterium можно получить алкапосодержащих средах L-тирозин (до 19 г/л); с помощью Corynebacterium glutamicum на глюкозной среде – L-валин (до 11 г/л; L-аргинин, L-гистидин, L-изолейцин – 15–20,8 г/л) [22].

1.4 Отходы производства растительного сырья как источник аминокислот В качестве исходных сырьевых компонентов могут быть использованы следующие отходы:

1.Растительные компоненты сельскохозяйственных культур: стебли зерновых и технических культур, корзинки и стебли подсолнечника, льняная костра, стержни кукурузных початков, картофельная мезга, трава бобовых культур, отходы сенажа и силоса, отходы виноградной лозы, чайных плантаций, стебли табака.

2.Отходы зерноперерабатывающей промышленности: отруби, отходы при очистке и сортировке зерновой массы (зерновые отходы), зерновая сорная примесь, травмированные зерна, щуплые и проросшие зерна, семена дикорастущих растений, некондиционное зерно [2].

3.Отходы консервной, винодельческой промышленности и фруктовые отходы: кожица, семенные гнезда, дефектные плоды, вытерки и выжимки, отходы винограда, отходы кабачков, обрезанные концы плодов, жмых, дефектные кабачки,

Лист

Изм. Лист № докум. Подпись Дата отходы зеленого горошка (ботва, створки, россыпь зерен, битые зерна, кусочки листьев, створки), отходы капусты, свеклы, моркови, картофеля.

4.Отходы сахарной промышленности: свекловичный жом, меласса, рафинадная патока, фильтрационный осадок, свекловичный бой, хвостики свеклы.

5.Отходы пивоваренной и спиртовой промышленности: сплав ячменя (щуплые зерна ячменя, мякина, солома и др. примеси), полировочные отходы, частицы измельченной оболочки, эндосперма, битые зерна, солодовая пыль, пивная дробина, меласса, крахмалистые продукты (картофеля и различных видов зерна), послеспиртовая барда, бражка.

6.Отходы чайной промышленности: чайная пыль, сметки, волоски, черешки.

7.Отходы эфирно-масличной промышленности: отходы травянистого и цветочного сырья.

8.Отходы масло-жировой промышленности: подсолнечная лузга, хлопковая шелуха [32].

Рассмотрим некоторые из них подробней.

Отруби Зерно злаков состоит из зародыша, эндосперма и семенной кожуры. Запас питательных веществ сосредоточен в эндосперме в виде крахмала. К моменту созревания зерна крахмалистый слой уже не содержит живых клеток. На периферии эндосперма остается лишь тонкий слой живых клеток, богатых запасными белками – алейроновый слой.

При современной технологии изготовления муки высших сортов, в отруби (отходы) идут цветочная оболочка (кожура) зерна, зерновой зародыш и алейроновый слой. Это, именно те части зерна, в которых сосредоточено 90 % биологически активных компонентов цельного зерна. Мука же, высших сортов – это чистый крахмал, в котором нет, ни живых клеток, ни активных микроэлементов, необходимых нашему организму.

В отрубях много клетчатки, а так же витамины группы В, витамины А и Е.

Витамина Е, в рационе современного человека катастрофически не хватает. Кроме того в отрубях содержатся микроэлементы, необходимые для нормального Лист Изм. Лист № докум. Подпись Дата протекания обменных процессов в организме: калий, кальций, фтор, медь, цинк, магний, хром, селен и др. Отруби можно смело отнести к полезным продуктам и продуктам здорового питания [3].

В зависимости от вида перерабатываемого зерна на муку и крупу отруби бывают пшеничные, ржаные, овсяные, рисовые, гречневые, просяные. В отрубях сосредоточено 90 % биологически активных компонентов цельного зерна. Отруби содержат от 16 до 20 % крахмала, 10–12 % белка, в том числе важнейшие аминокислоты (в %): метионин – 0,19; цистин – 0,30; аргенин – 1,0; лизин – 0,60; триптофан – 0,30; жир – 3,0–4,0; клетчатка – 10–30; зольные элементы (Na – 0,09, К – 1,00, Са – 0,16, Р – 0,94); микроэлементы и некоторые другие вещества [24].

Пивная дробина Солодовая дробина образуется как остаток после отделения жидкой фазы – пивного сусла – в процессе фильтрации затора. Дробина состоит из жидкой (45 %) и твердой фаз (55 %). Твердая фаза дробины содержит оболочку и нерастворимую часть зерна. Состав дробины зависит от качества солода, количества несоложенного сырья, а также сорта изготовляемого пива [9].

На предприятиях пивоваренной промышленности России (более 400 предпри ятий) ежегодно скапливается большое количество дробины влажностью 70–80 %, которая содержит в среднем более 20 % сухих веществ с высоким уровнем протеина (12–15 %), превышающим почти в 3 раза его содержание в ячмене [26].

В таблице 1.4 представлен химический состав свежей (сырой) и сухой пивной дробины [8].

Таблица 1.4 – Химический состав пивной дробины (в 1 кг)

–  –  –

Столь богатый белково-минеральный состав пивной дробины определяет ее использование в различных отраслях народного хозяйства [9].

Свекловичный жом Свекловичный жом является побочным продуктом процесса производства свекловичного сахара, представляя собой обессахаренную свекловичную стружку (80–82 % от массы переработанной сахарной свеклы с содержанием сухих веществ около 6,5–7,0 %).

Химический состав свежего свекловичного жома содержит (в сухом веществе) около 45–47 % целлюлозы, до 50 % пектиновых веществ, 2 % белка, 0,6–0,7 % сахара и около 1 % минеральных веществ, присутствуют витамины и органические кислоты.

Основным направлением использования свекловичного жома является применение его в рационах кормления крупного рогатого скота мясного и молочного направлений [38].

–  –  –

Теоретические и экспериментальные исследования проводились на кафедре «Бионанотехнология» при Федеральном государственном бюджетном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Кемеровского технологического института пищевой промышленности».

Общая схема исследования изображена на рисунке 2.1.1. Весь цикл исследований состоит из нескольких взаимосвязанных этапов.

На первом этапе для обоснования цели и формулировки задач был произведен анализ отечественных и зарубежных источников информации по теме исследования. Рассмотрены способы получения аминокислот: химический и микробиологический синтез, гидролиз природного белоксодержащего сырья, биотрансформация. Установлено, что микробиологический синтез является наиболее перспективным и экономически выгодным способом получения растительных аминокислот из отходов спиртового, мукомольного, сахарного и других производств.

На втором этапе исследовали химический состав сырья. Выбирали сырье с наибольшими показателями по белку для дальнейшего синтеза триптофана.

На третьем этапе изучили морфологические и физиолого-биохимические свойства Bacillus subtilis.

На четвертом этапе работы подбирали оптимальные условия культивирования. В питательной среде содержатся источники азота, углерода, соли калия, магния, фосфора. В качестве источника растительного сырья использовали из

–  –  –

Изм. Лист № докум. Подпись Дата мельченное растительное сырье (пшеничные отруби). В качестве продуцента был выбран штамм Bacillus subtilis.

На заключительном этапе исследовали химический состав продуктов биосинтеза.

–  –  –

Анализ литературы, проведенный на подготовительном этапе работы, позволил выбрать для проведения экспериментальных исследований следующие объекты.

– Отруби пшеничные ГОСТ 7169-66;

– Отруби ячменные ГОСТ 5784-60;

– Отруби ржаные ГОСТ 7170-66;

– Микроорганизмы Bacillus subtilis.

–  –  –

Для решения поставленных задач использовали стандартные, общепринятые методы свойств сырья и качества готовой продукции (органолептические, физико-химические, биохимические, микробиологические).

Для выявления оптимального сырья брали 3 вида отрубей. Изучали химический состав. Для этого проводили экстрагирование белков 10 % раствором сульфата аммония, центрифугировали и отделяли фугат для дальнейших исследований.

Определение количества белка проводили спектрофотометрическим методом с использованием биуретового реактива при длине волны 546 нм. Пептидные связи белка с солями меди в щелочной среде образуют комплекс фиолетового цвета. Белки предварительно осаждали трихлоруксусной кислотой. Количество белка в исследуемых образцах определяли по калибровочному графику, построенному для стандартных разведений известного вещества.

Общую фракцию липидов определяли по методу Фолча экстракцией липидов хлороформ-метаноловой смесью. Экстракт отмывают от водорастворимых примесей и высушивают, после чего определяют массу осадка.

Лист

Изм. Лист № докум. Подпись Дата Определение общих углеводов вели спектрофотометрическим методом с использованием антронового реактива при длине волны 625 нм. Предварительно готовят экстракт растворимых углеводов и гидролизат легкогидролизуемых углеводов. Содержание углеводов в исследуемой пробе определяют по градуировочному графику, построенному по результатам измерения оптической плотности растворов сравнения глюкозы.

Для культивирования Bacillus subtilis использовали выбранное сырье. На его основе готовили питательную среду с добавлением всех необходимых источников азота, фосфора, серы, хлора, калия и стимуляторов роста в виде минеральных солей, кукурузного экстракта, а также воду в оптимальных для биосинтеза конкретной аминокилсоты количествах. Для всех экспериментов использовали дистиллированную воду.

Для определения оптимальной температуры роста продуцента культивирование вели в термостате при температуре 25±0,5 °С и 37±0,5 °С.

Для определения оптимального времени культивирования микроорганизмы проращивали 3 и 6 суток.

Определение активной кислотности проводили с помощью иономера рН-150МИ.

Выход триптофана определяли спектрофотометрическим методом с использованием 0,1 М раствора гидроксида натрия при длине волны 280 нм.

2.4 Результаты исследований

Для достижения поставленной цели нами проведены исследования по использованию микробиологического синтеза для выделения триптофана. В качестве микроорганизмов был выбран род Bacillus subtilis.

Способ подготовки сырья для получения триптофана включает следующие технологические операции: отделение оболочек и более крупных частиц; экстрагирование белков; центрифугирование и отделение фугата.

Лист Изм. Лист № докум. Подпись Дата 2.4.1 Изучение химического состава сырья Для выбора наиболее подходящего сырья изучили химический состав трех видов отрубей.

Для определения белка отруби просеивали, выделяли фракцию с размером частиц не более 100 мкм. Проводили экстракцию в присутствие сульфат аммония.

Суспензию центрифугировали для отделения фугата. Определение количества белка проводили спектрофотометрическим методом с использованием биуретового реактива при длине волны 546 нм. Расчет белка вели по калибровочному графику на рисунке 2.4.1.1.

Оптическая плотность, % 0,1 0,08

–  –  –

Для определения общей фракции липидов проводили экстрагирование хлороформ-метаноловой месью. Навеску отрубей помещали в колбу на 25 мл, заливали 10–15 мл смеси хлороформа и метанола (2:1), перемешивали 5 мин, довели до метки и фильтровали через бумажный фильтр. Раствор перенесли в предварительно взвешенный сухой и чистый бюкс, в котором производили высушивание.

Сначала вели выпаривание на водяной бане, а затем сушили в термостате при 50–60 0С до постоянной массы.

Лист

Изм. Лист № докум. Подпись Дата Для определения общих углеводов получают экстракт растворимых углеводов, заливая навеску отрубей дистиллированной водой с последующей гомогенизацией и фильтрованием. Следующий этап – получение гндролизатов легкогидролнзуемых углеводов. Оставшийся осадок кипятят с серной кислотой и отфильтровывают. Экстракт и гомогенезат осветляют сернокислым или уксуснокислым цинком.



Pages:   || 2 | 3 |

Похожие работы:

«Министерство образования и науки Российской Федерации Письмо от 16 февраля 2015 года № ВК-333/07 Об организации работы по введению ФГОС образования обучающихся с ОВЗ Заместителям руководителейвысших исполнительных органов государственной власти субъектовРоссийской ФедерацииРуководителям органов исполнительной власти субъектов Российской Федерации,осуществляющих государственноеуправление в сфере образования В соответствии с частью 6 статьи 11 Федерального закона от 29 декабря 2012 г. № 273-Ф Об...»

«Лекция 1. Основы БЖД на производстве. Труд, его виды, стороны труда (объект и субъект труда). Труд – это процесс преобразования человеком предметов окружающей действительности (и изменение в ходе этого самого себя) с целью удовлетворения общественных и личных, материальных и духовных потребностей. Специфически человеческими особенностями труда считают: наличие осознавания цели до начала труда (чем человек отли-чается от пчелы, по К. Марксу), осознанное использование средств и «орудий», замена...»

«УПОЛНОМОЧЕННЫЙ ПО ПРАВАМ ЧЕЛОВЕКА В АСТРАХАНСКОЙ ОБЛАСТИ ДОКЛАД О ПОЛОЖЕНИИ С ПРАВАМИ ЧЕЛОВЕКА В АСТРАХАНСКОЙ ОБЛАСТИ В 2014 ГОДУ Астрахань Доклад о положении с правами человека в Астраханской области в 2014 году. Астрахань: ООО “Типография “Новая Линия”, 2015. 117 с. Уполномоченный по правам человека в Астраханской области, 2015 ООО “Типография “Новая Линия”, 2015 Фото на обложке В.Д. Лоянича РАЗДЕЛ I. ИНСТИТУТ УПОЛНОМОЧЕННОГО ПО ПРАВАМ ЧЕЛОВЕКА В АСТРАХАНСКОЙ ОБЛАСТИ В 2010–2014 гг.: ОСНОВНЫЕ...»

«СВОДНЫЙ ДОКЛАД о результатах мониторинга эффективности деятельности органов местного самоуправления городских округов и муниципальных районов Республики Карелия за 2014 год Общая информация о городских округах и муниципальных районах Республики Карелия Среднегодовая Информация о размещении доклада главы численность Наименование городского округа, Административный центр в сети «Интернет» (адрес постоянного муниципального района муниципального района официального сайта МО/ населения в ссылка по...»

«Министерство природопользования и экологии Рязанской области ИНФОРМАЦИЯ о проведении ДНЕЙ ЗАЩИТЫ ОТ ЭКОЛОГИЧЕСКОЙ ОПАСНОСТИ В РЯЗАНСКОЙ ОБЛАСТИ В 2013 ГОДУ г. Рязань СОДЕРЖАНИЕ №№ Наименование разделов Стр. п/п Раздел 1. Общая информация Раздел 2. План основных мероприятий по подготовке и проведению Общероссийских Дней защиты от экологической опасности в Рязанской области в 2013 году Раздел 3. Обобщенные данные по проведенным мероприятиям Дней защиты от экологической опасности в Рязанской...»

«Павел В. Меньшиков Бухгалтерия без авралов и проблем. Руководство для главного бухгалтера Текст предоставлен издательством http://www.litres.ru/pages/biblio_book/?art=6653377 Бухгалтерия без авралов и проблем. Руководство для главного бухгалтера / Павел Меньшиков: Манн, Иванов и Фербер; Москва; ISBN 978-5-00057-014-2 Аннотация Эта книга написана главным бухгалтером для главных бухгалтеров. Она о том, как создать эффективную бухгалтерию, сделать ее уважаемым и высокооплачиваемым подразделением;...»

«БИБЛИОТЕЧНОБИБЛИОГРАФИЧЕСКАЯ КЛАССИФИКАЦИЯ ББК 78.36 Б59 СОСТАВИТЕЛИ: Н.Н.Асеева, Г.П.Ванская (ответственная за выпуск), Н.Е. Васильева, Н.А. Волкова, Н.Н. Голоднова (редактор), Л.З. Гуревич, Г.М. Жукова, О.А. Иванова, Л.И. Литвиненко, И.А.Малахова, И.П. Мартюкова, А.Л. Петрова, Л.А. Трубачева М.А. Ходанович, Г.В. Яковлева. ПРЕДИСЛОВИЕ Все универсальные библиотечные классификации проходят фактически одинаковый цикл в своем существовании: формирова­ ние — стабильное функционирование — моральное...»

«Бюллетень № 3 В защиту науки Российская Академия Наук Комиссия по борьбе с лженаукой и фальсификацией научных исследований Бюллетень «В защиту науки» Электронная версия Бюллетень издается с 2006 года Редакционная коллегия: Э.П. Кругляков – отв. редактор, Ю.Н. Ефремов – зам. отв. редактора, Е.Б. Александров, П.М. Бородин, С.П. Капица, В.А. Кувакин, А.Г. Литвак, Р.Ф. Полищук, Л.И. Пономарв, М.В. Садовский, В.Г. Сурдин, А.М. Черепащук В бюллетене «В защиту науки» помещаются статьи, отобранные...»

«СБОРНИК МАТЕРИАЛОВ семинара-совещания руководителей контрольно-счётных органов субъектов Российской Федерации Практика реализации полномочий контрольносчётных органов субъектов РФ по оценке осуществления главными администраторами бюджетных средств внутреннего финансового контроля и внутреннего финансового аудита. Взаимодействие органов внешнего и внутреннего государственного финансового контроля на уровне субъектов Российской Федерации 15 октября 2015 года г. Воронеж Содержание Приветствие...»

«ОТЧЕТ о выполнении Плана мероприятий по реализации Послания Главы Республики Бурятия к народу Республики Бурятия и Народному Хуралу Республики Бурятия на 2014 – 2015 годы, утвержденного распоряжением Правительства РБ от 08.07.2014 года № 395-р, за 2014 год №№ Наименование Сроки Результаты выполнения п/п мероприятия исполнения Стимулирование инвестиционной и инновационной деятельности 1. Проведение семинара по 2014 г. 28 ноября проведен семинар «Создание благоприятного инвестиционного климата в...»

«Maнucmеpcmвo oбpсtзoванaяa на-укaPoccuЙcкoЙ Феdеpацuш H оцuoн альн ьtЙ accлelo ваmeльcкaЙ яd epньtЙ унuвepсumеm (MИФII)) Пoлoясениe yслyг 4.2 Мoнитopw{ги изМеpениe Пoлoelceнue o фopмapoваншu фoнdа oцeнoчнtлх cpеdcmв в сMк-ПЛ.8.2-05 HIIЯУMIIФИ УTBЕP.цAIO 201.4t. ПoЛoжЕниЕ СIIСTEMА MEHEД)КMEHTА КАqEСTBА cpedcmвв HИЯУ MИФИ Irолояceнueo фopлlapованua фoнdаoценoчIrblх сМк-ПЛ-8.2-05 Bерсия2.0 201.4r. -/с, flaтa введения: 15 ) сoгЛACoBAIIo Пpедстaвитель pyкoBoДстBa пo кaчестBy' пpopeктoр пo...»

«ISSN 2073 Российская Академия предпринимательства ПУТЕВОДИТЕЛЬ ПРЕДПРИНИМАТЕЛЯ Научно практическое издание Выпуск XV Включен в Перечень ведущих рецензируемых научных журналов и изданий, рекомендованных ВАК Министерства образования и науки Российской Федерации Москва Путеводитель предпринимателя. Выпуск XV ББК 65.9(2Рос) УДК 330. УДК 340. П Редакционный совет: Балабанов В.С. – д.э.н., профессор, Заслуженный деятель науки РФ, гл. редактор Булочникова Л.А. – д.э.н., профессор, научный редактор...»

«Доклад на заседании секции №3 НТС ФГУП ЦНИИмаш по вопросу «Общий замысел геодезических направлений исследований в рамках НИР «Развитие»» от 28 мая 2013 года Общий замысел геодезических направлений исследований в рамках НИР «Развитие». Исследование проблемных вопросов геодезического обеспечения системы ГЛОНАСС. Исследование проблемных вопросов навигационногеодезического обеспечения объектов ракетно-космической техники В.С. Вдовин ФГУП «ЦНИИмаш», г. Королв 1. Направления исследований. 1.1....»

«Vdecko vydavatelsk centrum «Sociosfra-CZ» State University named after Shakarim Semey City Penza State Technological University SOCIAL AND ECONOMIC DEVELOPMENT AND QUALITY OF LIFE: HISTORY AND MODERN TIMES Materials of the V international scientific conference on March 15–16, 2015 Prague Social and economic development and quality of life: history and modern times: materials of the V international scientific conference on March 15–16, 2015. – Prague : Vdecko vydavatelsk centrum «Sociosfra-CZ»....»

«Общественная палата Саратовской области ДоклаД о состоянии гражданского общества в Саратовской области в 2013 году Саратов УДК 304.9 ББК 67.7 Д63 Д63 Доклад Общественной палаты Саратовской области «О состоянии гражданского общества в Саратовской области в 2013 году» Настоящий Доклад Общественной палаты Саратовской области «О состоянии гражданского общества в Саратовской области в 2013 году» подготовлен в соответствии со статьей 22 Закона Саратовской области от 9 ноября 2007 года № 243-ЗСО «Об...»

«Сводный отчет по 1-му этапу работ по разработке схем теплоснабжения городских округов и поселений в ЯНАО на 2014 год и на перспективу до 2028 года Том 2. Книга 8. Пуровский район. 8.6. д. Харампур. Главы 1,2,4,5,8 обосновывающих материалов к схемам теплоснабжения ООО «Нексиа Пачоли Консалтинг» Отчет по 1-ому этапу работ по разработке схем теплоснабжения городских округов и поселений в ЯНАО на 2014 год и на перспективу до 2028 года Том 2. Книга 8.6 Состав работы Сводный отчет по 1-му этапу работ...»

«О секте анастасийщины. Ибо будет время, когда здравого учения принимать не будут, но по своим прихотям будут избирать себе учителей, которые льстили бы слуху; и от истины отвратят слух и обратятся к басням (2 Тим. 4, 3-4) На протяжении последних нескольких лет на российском рынке духовности появилось великое множество разнообразного товара. Формула основателя саентологии Р.Хаббарда о выгодности придумывания собственной религии продолжает подтверждаться множеством примеров. Одним из них стало...»

«ISSN 0371 — 7089 Министерство природных ресурсов и экологии Российской Федерации Федеральная служба по гидрометеорологии и мониторингу окружающей среды ТРУДЫ ГОСУДАРСТВЕННОГО УЧРЕЖДЕНИЯ «ГИДРОМЕТЕОРОЛОГИЧЕСКИЙ НАУЧНО-ИССЛЕДОВАТЕЛЬСКИЙ ЦЕНТР РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ» ГИДРОМЕТЕОРОЛОГИЧЕСКИЕ ПРОГНОЗЫ Под редакцией д-ра геогр. наук Е.С. Нестерова Москва 551.465:551.509 Редакционная коллегия д-р техн. наук Р.М. ВИЛЬФАНД (главный редактор), д-р геогр. наук А.А. ВАСИЛЬЕВ (редактор), д-р физ.-мат. наук...»

«АСТРАХАНСКИЙ ВЕСТНИК ЭКОЛОГИЧЕСКОГО ОБРАЗОВАНИЯ № 2 (32) 2015. с. 90-104. Охрана окружающей среды ЧЕРНОБЫЛЬСКАЯ КАТАСТРОФА: 29 ЛЕТ СПУСТЯ Олег Александрович Бондаренко Государственная экологическая академия последипломного образования и управления Минприроды Украины Ярослав Иванович Мовчан Национальный авиационный университет/ Национальный Экологический Центр Украины yaroslav.movchan@gmail.com Оксана Григорьевна Тарасова Национальный авиационный университет Лев Сергеевич Балашов Институт...»

«Федеральное Агентство Научных Организаций РФ  Российская Академия наук  ФГБУН Институт геологии Дагестанского научного центра РАН   ФГБУН Геологический институт РАН  Российский Фонд Фундаментальных Исследований  Комиссия по юрской системе МСК России    ЮРСКАЯ СИСТЕМА РОССИИ:   ПРОБЛЕМЫ СТРАТИГРАФИИ И ПАЛЕОГЕОГРАФИИ    ШЕСТОЕ ВСЕРОССИЙСКОЕ СОВЕЩАНИЕ    Махачкала, 1520 сентября 2015 г.     JURASSIC SYSTEM OF RUSSIA:    PROBLEMS OF STRATIGRAPHY AND PALEOGEOGRAPHY    SIXTH ALLRUSSIAN MEETING    ...»








 
2016 www.nauka.x-pdf.ru - «Бесплатная электронная библиотека - Книги, издания, публикации»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.